Taq antibody封闭机制深度解读

我们在选择热启动封闭抗体的时候，常常会步入以下误区：

误区一 热启动封闭抗体的好坏取决于抗体的亲和力

按照以往的认知，抗体有足够亲和力才能与DNA聚合酶结合，才能有效封闭。其实抗体结合于DNA聚合酶的活性封闭位点是有差异的，如果不能结合在有效阻断聚合酶活性的位点上，亲和力再高也是无用的。所以热启动封闭抗体结合位点非常重要，一个优质的热启动封闭抗体，应该能准确的结合活性封闭位点并阻断DNA聚合酶的聚合酶活性。

误区二 小鼠腹水生产的抗体性能稳定性不如大规模细胞悬浮生产

与人工操作的体外模拟生长环境的罐间悬浮生产不同，一方面腹水提供了天然的细胞生长环境，营养充足，有利于杂交瘤细胞的生长，通过控制相同遗传背景的小鼠数量即可保证生产的效率。在实际的热启动封闭抗体生产中，小鼠腹水生产非常稳定高产，月产40g不是难事。另一方面腹水属于天然免疫系统，抗体折叠修饰翻译更加天然，保证了抗体的结构性能。两种方式关键点均在于设置严苛的生产流程和质控标准。

误区三 预变性时间越短越好

PCR反应中预变性步骤是为了打开DNA中的二级结构，使DNA充分变性；如果使用了热启动DNA聚合酶，预变性步骤可以解除封闭，释放DNA聚合酶活性。

但由于DNA模板如果长时间暴露在95℃，pH<8.3的条件下容易造成脱嘌呤和断裂，DNA聚合酶长时间在高温下也可能活性降低，人们往往认为预变性时间越短越好。对此一是建议大家选择抗体封闭，因为相较于某些化学修饰法，抗体封闭的活性释放条件更温和，时间也更短；二是提醒大家，预变性不仅是为了解除封闭释放聚合酶活性，也为了使DNA充分变性，尤其对于复杂结构模板，充分的预变性必不可少。